Иммунофенотипирование гемобластозов

Категория: Анализы крови, мочи, кала, мокроты, кишечника, сердца, мозга и др.

Значительный прогресс в гематологических исследованиях связан в последние годы с использованием современных иммунологических методов и автоматизированных средств анализа и сортировки клеток периферической крови и костного мозга — проточных цитометров. Традиционные морфологические и цитохимические исследования клеток субстрата болезни (кровь, красный костный мозг, лимфатические узлы, селезёнка и т.д.) во многих случаях, особенно при лимфопролиферативных заболеваниях, не позволяют выявить всё многообразие вариантов среди морфологически сходных форм и установить источник происхождения патологического клона. Эти задачи могут быть решены только путём изучения иммунологической характеристики клеток. Каждой стадии дифференцировки гемо-поэтических клеток соответствует свой набор Аг, которые по международной классификации называются дифференцировочными и разделяются на кластеры дифференцировки, обозначаемые CD. При неопластических изменениях блок дифференцировки может произойти на любой стадии нормального развития клеток, в результате чего образуется клон патологических клеток, определяющих субстрат болезни и имеющих одинаковую иммунологическую (или фенотипическую) характеристику. Проведя исследования этих маркёров на клетках, можно определить, какой форме и варианту заболевания они соответствуют, то есть на основе иммунологического фенотипа клеток проводить дифференциальную диагностику, которая наиболее трудна при лимфопролиферативных заболеваниях, потому что основной клеткой патологического субстрата болезни являются морфологически почти однотипные клетки. Фенотипирование позволяет с помощью моноклональных АТ типировать бластные и зрелые клетки крови миело-, моно-, лимфоцитарного ряда по наличию дифференциро-вочных Аг (рецепторов) в клеточной стенке.  На мембранах клеток крови и красного костного мозга можно выявить следующие Аг (маркёры).

■ CD2 — мономерный трансмембранный гликопротеид. Он присутствует на поверхности всех циркулирующих в крови Т-лимфоцитов и на некоторых NK-лимфоцитах. CD2 принимает участие в процессе альтернативной активации Т-лимфоцитов. Выявление CD2 с помощью моноклональных АТ в клинической практике используют для феноти-пирования острых Т-клеточных лейкозов, лимфом, хронических воспалительных и иммунодефицитных состояний.

■ CD3 — белковый комплекс, ассоциированный с Аг-специфическим Т-клеточным рецептором, это основной функциональный маркёр Т-лимфоцитов. Он способствует передаче сигнала активации с мембра

ны в цитоплазму клетки. Определение CD3 показано для диагностики острых Т-клеточных лейкозов, лимфом (CD3 не экспрессируется при не-Т-клеточных лимфоидных новообразованиях) и иммунодефицит-ных заболеваний.

■ CD4 — трансмембранный гликопротеид, экспрессируемый субпопуляцией Т-хелперов (индукторов), составляющих 45% лимфоцитов периферической крови. На ранних стадиях развития лимфоцитов в тимусе, Аг CD4, так же как CD8, экспрессируется всеми кортикальными лимфоцитами. Медуллярные тимоциты, фенотип которых схож со зрелыми CD4+Т-клетками периферической крови (Т-хелперы), экспресси-руют уже либо CD4, либо CD8 рецепторы. В периферической крови до 5% клеток несут одновременно маркёры CD4 и CD8. Незначительная экспрессия CD4 возможна на некоторых клетках моноцитарного ряда. CD4 экспрессируется в большинстве случаев Т-клеточных лимфом, включая грибовидный микоз, а также при HTLV-ассоциированном Т-клеточном лейкозе (HTLV — human T-lymphotropic virus — Т-лим-фотропный вирус человека).

■ CD5 — одноцепочечный гликопротеид, присутствующий на всех зрелых Т-лимфоцитах и большинстве тимоцитов, слабо экспрессируется В-лимфоцитами. CD5 выявляют на неопластических клетках В-кле-точного хронического лимфоцитарного лейкоза и центроцитарной лимфомы. При других типах злокачественных лимфоидных заболеваний — фолликулярной лимфоме, волосатоклеточном лейкозе, крупноклеточной лимфоме — CD5 не экспрессируется.

■ CD7 — одноцепочечный белок, самый ранний маркёр Т-клеточной дифференцировки. Он экспрессируется про-Т-лимфоцитами ещё до миграции их в тимус. CD7 выявляют на большинстве NK-клеток, слабая экспрессия отмечена на моноцитах. В-лимфоциты и гранулоциты не содержат этого Аг. Определение CD7 применяют в целях диагностики лимфом, детских Т-клеточных лимфобластных лейкозов.

■ CD8 — белок, состоящий из двух полипептидных цепей, связанных дисульфидными мостиками. Он экспрессируется субпопуляцией ци-тотоксических и супрессорных Т-лимфоцитов, которые составляют 20-35% лимфоцитов периферической крови. Этот Аг имеют также NK-лимфоциты, кортикальные тимоциты, 30% медуллярных тимоци-тов и субпопуляции клеток красного костного мозга. CD8 исследуют для количественной оценки содержания Т-супрессоров

■ CD 10 — ассоциированная с клеточной мембраной эндопептидаза. CD10 экспрессируют молодые формы В-лимфоцитов и субпопуляция кортикальных лимфоцитов. CD10 экспрессируют все клетки ОЛЛ.

■ CD11с экспрессируют на клеточной мембране макрофаги, моноциты, гранулоциты, NK-клетки и клетки волосатоклеточного лейкоза.

■ CD13 — гликопротеид, экспрессируемый клетками миеломоноцитар-ного ряда (клетки-предшественники, нейтрофилы, базофилы, эозино-филы, моноциты и клетки миелоидных лейкозов). Он отсутствует на Ти В-лимфоцитах, эритроцитах и тромбоцитах.

■ CD14 — поверхностный мембранный гликопротеид. Его экспрессируют в основном моноциты и макрофаги. CD14 определяют более чем на

95% моноцитах периферической крови и костного мозга. Сильную экспрессию CD14 наблюдают при острых миелобластных лейкозах. При острых и хронических лимфобластных лейкозах этот Аг не экспресси-руется.

■ CD15 представляет собой олигосахарид. Он принимает участие в процессах фагоцитоза и хемотаксиса. Этот Аг присутствует на поверхности зрелых гранулоцитов и клетках Березовского-Штернберга. Экспрессию Аг CD15 выявляют при болезни Ходжкина. При неходжкинских лим-фомах CD15 в большинстве случаев не обнаруживают.

■ CD16 экспрессируется на поверхности гранулоцитов, моноцитов, макрофагов и NK-клеток. Все лимфоциты, экспрессирующие этот Аг, обладают способностью к антителозависимой клеточной цитотоксичнос-ти. CD16 определяют при типировании хронических миелоцитарных лейкозов, для характеристики NK-клеток.

■ CD 19 — гликопротеин, присутствующий на всех периферических В-лимфоцитах, а также на всех предшественниках В-клеток. Он отсутствует на плазматических клетках. Это самый ранний маркёр В-клеток, играет важную роль в регуляции активации и пролиферации В-лимфоцитов. CD19 экспрессируется на всех неопластических клетках острых лейкозов В-клеточного происхождения, а также присутствует при некоторых формах острых монобластных лейкозов.

■ CD20 — негликозилированный белок. В онтогенезе В-лимфоцитов Аг CD20 появляется после CD19 на стадии пре-В-клеточной дифферен-цировки лимфоцитов. На плазматической мембране плазматических клеток он отсутствует. Экспрессируется при ОЛЛ, В-клеточных хронических лимфоцитарных лейкозах, волосатоклеточных лейкозах, лим-фомах Беркитта и очень редко — при острых монобластных лейкозах.

■ CD21 — гликопротеид, в значительном количестве присутствует на В-лимфоцитах в лимфоидных органах и в небольшом количестве — на В-клетках периферической крови. CD21 — рецептор для вируса Эп-стайна-Барр.

■ CD22 — белок, состоящий из двух полипептидных цепей. Экспрес-сируется на мембране большинства В-лимфоцитов, включая клетки-предшественники (пролимфоциты). Аг не экспрессируется на В-лимфоцитах (плазматические клетки) после их активации. Наиболее выраженную экспрессию CD22 выявляют на клетках при волосатокле-точном лейкозе, слабую — при миелоидных лейкозах и не-Т-клеточ-ных ОЛЛ.

■ CD23 — гликопротеид, экспрессируемый активированными В-лим-фоцитами периферической крови в гораздо большей степени. CD23 опосредует IgE-зависимую цитотоксичность и фагоцитоз макрофагами и эозинофилами.

■ CD25 — одноцепочечный гликопротеид, идентифицированный как низкоаффинный рецептор к ИЛ-2. Этот рецептор экспрессируется на активированных Т-лимфоцитах и, с меньшей плотностью, на активированных В-клетках. В периферической крови здоровых людей Аг присутствует более чем на 5% лимфоидных клеток.

■ CD29 — рецептор фибронектина. Широко распространён в тканях, экспрессируется лейкоцитами. Определение CD29 на клетках пери

ферической крови используют для типирования субпопуляции Т-кле-ток, имеющих фенотип CD4+CD29+, которые называют хелперами 2 типа (Th2). Эти клетки посредством продукции лимфокинов участвуют в реализации гуморального иммунного ответа.

■ CD33 — трансмембранный гликопротеид. Присутствует на поверхности клеток миелоидного и моноцитарного рядов. Его обнаруживают на поверхности моноцитов и, в меньшей степени, гранулоцитов периферической крови. Приблизительно 30% клеток красного костного мозга экспрессируют CD33, включая миелобласты, промиелоциты и миелоциты. Аг отсутствует на мембранах полипотентных стволовых клеток. Определение CD33 используют для характеристики клеток при лейкозах миелоидного происхождения. Клетки лейкозов лимфоидного и эритроидного происхождения не экспрессируют CD33.

■ CD34 — фосфогликопротеин, экспрессируется гемопоэтическими клетками-предшественниками, включая монопотентные стволовые клетки. Наиболее выраженную экспрессию Аг наблюдают у ранних предшественников; при созревании клеток экспрессия маркёра падает. CD34 обнаружен также на эндотелиальных клетках. Определение CD34 используют для характеристики клеток при острых миело- и лимфо-бластных лейкозах. При хронических лимфоцитарных лейкозах и лим-фомах экспрессии Аг CD34 не выявляют.

■ CD41a экспрессируется тромбоцитами и мегакариоцитами. Монокло-нальные АТ для выявления CD41a используют для диагностики ме-гакариобластного лейкоза. При тромбастении Глянцманна экспрессия этого Аг отсутствует или значительно подавлена.

■ CD42b — мембранный гликопротеид, состоящий из двух полипептидных цепей. Маркёр выявляют на поверхности тромбоцитов и мегакарио-цитов. В клинической практике обнаружение CD42b используют для диагностики тромбоцитопатии — синдрома Бернара-Сулье.

■ CD45RA принадлежит к классу трансмембранных гликопротеинов. Это общий лейкоцитарный Аг. Экспрессируется на клеточной мембране В-лимфоцитов, в меньшей степени Т-лимфоцитов и на зрелых медуллярных тимоцитах. Маркёр не экспрессируется гранулоцитами.

■ CD45RО — низкомолекулярная изоформа CD45RA — общего лейкоцитарного Аг. Выявляют на Т-клетках (Т-лимфоциты памяти), субпопуляции В-лимфоцитов, моноцитах и макрофагах. Моноклональные АТ к CD45RО взаимодействуют с большинством тимоцитов, субпопуляцией покоящихся CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов и зрелыми активированными Т-клетками. Клетки миеломоноцитарного происхождения, гранулоциты и моноциты также несут этот Аг. Его выявляют при цен-тробластных и иммунобластных лимфомах.

■ CD46 — О-гликозилированный димер. Он широко распространён в тканях и экспрессируется Т- и В-лимфоцитами, моноцитами, гра-нулоцитами NK-клетками, тромбоцитами, эндотелиальными клетками, фибробластами, но отсутствует на поверхности эритроцитов. CD46 обеспечивает защиту тканей от действия комплемента.

■ CD61 — тромбоцитарный Аг. Экспрессируется на тромбоцитах периферической крови и красного костного мозга, а также на мегакариоци-тах и мегакариобластах. Его определение используют в качестве маркё

ра при острых мегакариобластных лейкозах. Экспрессия Аг отсутствует или подавлена у больных с тромбастенией Глянцманна.

■ CD95, называемый также Fas или APO-1, — трансмембранный гли-копротеин, член семейства рецепторов фактора некроза опухолей. Он экспрессируется в значительных количествах на Т-лимфоцитах (CD4+ и CD8+) периферической крови и, в меньшей степени, на В-лим-фоцитах и NК-клетках. Этот Аг экспрессируется также на гранулоци-тах, моноцитах, клетках тканей и неопластических клетках. Связывание CD95 с Fas-лигандом (CD95L), индуцирует в клетках апоптоз.

■ CD95L, или Fas-лиганд, мембранный белок, относящийся к семейству рецепторов фактора некроза опухолей. Этот Аг экспрессируется цито-токсическими Т-лимфоцитами, NК-клетками и очень часто опухолевыми клетками; основной индуктор апоптоза в клетках.

■ HLA-DR — мономорфная детерминанта молекул II класса главного комплекса гистосовместимости человека (HLA). Маркёр экспрессиру-ется на клетках Лангерганса, дендритных клетках лимфоидных органов, определённых типах макрофагов, В-лимфоцитах, активированных Т-клетках и эпителиальных клетках тимуса. Исследование на данный маркёр используют для количественного определения активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+ HLA-DR+.

Используя различный подбор моноклональных АТ к маркёрам, можно составить фенотипический портрет клеток, характерных для данной формы лейкоза (табл.-7-30).

Помимо использования методов иммунофенотипирования для диагностики и дифференциальной диагностики гемобластозов, особенно важным оказалось их применение в процессе лечения для оценки состояния ремиссии и остаточной популяции лейкозных клеток. Зная фенотипический «портрет» бластных клеток в период установления диагноза, по этим маркёрам удаётся обнаружить клетки лейкозного клона в период ремиссии, а по нарастанию их количества — предсказать развитие рецидива задолго (за 1-4 мес) до появления его клинико-морфологических признаков.

Таблица  Иммунофенотипическая характеристика лейкозов [Myers A.R., 1996]

Таблица  Иммунофенотипическая характеристика лейкозов [Myers A.R., 1996]


Иммунофенотипирование гемобластозов Фото 1

Таблица  Иммунофенотипы ОЛЛ [Rich R.R., 2001]

Таблица  Иммунофенотипы ОЛЛ [Rich R.R., 2001]


Иммунофенотипирование гемобластозов Фото 2
Иммунофенотипирование гемобластозов Фото 3

Окончание табл.

Окончание табл.


Иммунофенотипирование гемобластозов Фото 4

Примечание: cig ц — цитоплазматический Ig ц цепь; sig ц — поверхностный Ig ц цепь.

Интересное